펩타이드 합성 단계

깨끗하고 건조한 반응 튜브에서 2.0g의 블랭크 Wang 수지를 계량하고 DMF 15mL를 첨가하고 실온에서 약 30분 동안 활성화합니다.

실온에서 샌드 코어를 통해 이전 단계의 용매를 걸러내고 끝에 1mmol 5몰 과량 C 첫 번째 아미노산, 5배 몰 과량 DMAP, 5몰 과량 DIC, DMF 용매 실온 반응을 3시간 수행합니다. 반응이 완료된 후 사용하십시오. DMF Wash 4~6회, 매 mL마다 5~6회. 그런 다음 피리딘과 아세트산 무수물을 부피비 1:1로 적당량 첨가하고 30분간 반응시킵니다. 반응이 완료된 후 사용하십시오. DMF Wash 4~6회, 매 mL마다 5~6회. (효과: 반응하지 않는 빈 수지의 활성 마이크로도트를 차단합니다.)

흡인여과로 이전 단계의 용매를 제거하고 20% 피페리딘 DMF 10 mL를 첨가한다. 레진에 용액을 넣고 N2 10분간 교반한다. 마지막으로 용액을 여과하고 20% 피페리딘 DMF 용액 10 mL를 넣고 N2 불어넣고 5분간 교반한다. 그런 다음 용액을 여과하고 이 과정을 2회 반복한다. DMF 4회 세척, 메탄올로 2회 세척, 매회 5~6회 mL.

소량의 레진을 꺼내어 메탄올로 3회 세척한 후 닌히드린, KCN, 페놀용액을 한 방울씩 첨가하고 105~110도에서 5분간 가열하고 진한 파란색으로 변하는 것은 양성반응으로 제거가 완료되어 다음 단계의 반응이 진행될 수 있음을 나타낸다. 무색인 경우에는 보호기가 완전히 제거되지 않은 것이므로 위의 탈보호 작업을 반복해야 한다.

3배 몰 과량 C 말단의 두 번째 아미노산, 3배 몰 과량의 HBTU 및 3배 몰 과량의 HOBT를 칭량 반응관에 적당량의 DMF를 첨가한다. 용액이 완전히 용해된 후 10배 몰 과량(순수) DIEA를 첨가하고, 상온 반응 40분, DMF를 사용하여 4~6회, 매회 5~6회 mL 세척한다. 소량의 레진을 취하여 닌히드린 검출시약으로 시험하면 무색으로 나타나고 피페리딘 20% DMF 용액 10mL를 첨가한다. 용액 제거 Fmoc, 10분간 2회, 5분간 실시 DMF 사용 후 4회 세척, 메탄올로 2회 세척, 매회 5~6회 mL. 소량의 레진을 꺼내어 사용하고 닌히드린 검출시약을 사용하여 검출합니다. 검출이 파란색이면 반응의 다음 단계로 진행할 수 있습니다.

마지막으로 트리플루오로아세트산 절단 용액(95% TFA:2% TIS:2% EDT:1% H2O)을 사용하여 2시간 동안 절단하고 반응 용액을 흡인 여과하여 폴리펩티드의 트리플루오로아세트산 용액을 얻습니다. 용해물을 최대한 질소로 건조시킨 후 에테르로 침전시키고 원심분리한 후 에테르로 3초간 세척한다. ~5회, 백색 고체를 얻었다. 순수한 물에 녹인 후 HPLC에서 탈염 및 정제, 동결{11}}하여 결정을 침전시킨 후 소량의 MS 분석을 실시합니다.